NP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421951

概要

ニューロナル・ペントラキシン1（Neuronal pentraxin 1：Nptx1／NP1）は分泌型のニューロナル・ペントラキシンで、興奮性シナプスに多く存在し、活動依存的なシナプス再編やグルタミン酸作動性シグナル伝達の構築に寄与します。NP1は、AMPA受容体のクラスター形成やシナプスの安定化に影響する細胞外タンパク質ネットワークに関与し、神経活動を回路の洗練化や可塑性につなげます。マウスの系では、Nptx1の制御は、シナプス形成、神経突起の伸長、ならびに経験依存的な結合性を形作るカルシウム依存性シグナル伝達カスケードなどの過程と関連づけられてきました。NP1の発現変化やニューロナル・ペントラキシン経路の動態異常は、神経変性や発作に関連する表現型にも関与するとされ、シナプス機能障害の機序解析における重要性が示唆されています。

NP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNptx1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nptx1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nptx1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nptx1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NP1の機能に不可欠なNptx1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nptx1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nptx1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NP1 HDRプラスミド（m）および NP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNptx1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNptx1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。