NOS2/iNOS Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421928-ACT

O Nos2 de camundongo codifica a sintase do óxido nítrico induzível (NOS2/iNOS), uma enzima responsiva à inflamação que catalisa a produção de óxido nítrico a partir de L-arginina, modulando o equilíbrio redox e a defesa antimicrobiana. A iNOS é regulada transcricionalmente a jusante de sinais da imunidade inata, incluindo vias mediadas por NF-κB e por interferons, e contribui para a polarização de macrófagos e para redes de citocinas. A atividade sustentada de NOS2 pode promover estresse nitrosativo, S-nitrosilação de proteínas e dano ao DNA, relacionando a sinalização desregulada de óxido nítrico a lesão tecidual inflamatória e a alterações na biologia do microambiente tumoral. Nos2 é amplamente utilizado como leitura funcional de células mieloides ativadas e como um nó mecanístico que conecta a estimulação imune a respostas de estresse metabólico e oxidativo.

NOS2/iNOS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nos2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NOS2/iNOS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nos2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nos2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NOS2/iNOS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nos2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NOS2/iNOS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NOS2/iNOS em células tumorais com expressão de Nos2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.