NOS2/iNOS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400066-ACT

O NOS2 humano codifica a sintase do óxido nítrico induzível (iNOS), uma enzima responsiva à inflamação que gera óxido nítrico a partir de L-arginina e modula a sinalização redox, a regulação do tônus vascular e a defesa antimicrobiana. O NOS2/iNOS é fortemente regulado pelo NF-κB e por vias de citocinas dependentes de JAK/STAT e pode remodelar o metabolismo celular e a função mitocondrial por meio de estresse nitrosativo e oxidativo. A atividade desregulada de NOS2 tem sido associada a estados inflamatórios crônicos, interações hospedeiro–patógeno e remodelamento imune associado a tumores, por efeitos sobre respostas a dano no DNA, angiogênese e polarização de células imunes. Como mediador dependente do contexto na sinalização por óxido nítrico, o NOS2 é amplamente estudado em macrófagos, células epiteliais e modelos de câncer para dissecar circuitos inflamatórios e adaptação ao estresse.

NOS2/iNOS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NOS2/iNOS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NOS2/iNOS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NOS2/iNOS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NOS2/iNOS em células tumorais com expressão de NOS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.