Nogo Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427106

Panoramica

Rtn4 codifica Nogo, una reticulon associata al reticolo endoplasmatico (RE) che modella le membrane tubolari del RE e contribuisce all’omeostasi degli organelli in neuroni e cellule gliali. Le isoforme di Nogo influenzano anche la crescita dei neuriti e la plasticità sinaptica modulando la dinamica del citoscheletro e le vie di segnalazione legate alla guida assonale e alla rigenerazione. Nel sistema nervoso centrale, l’inibizione dell’estensione dei neuriti mediata da Nogo è rilevante per i meccanismi che limitano il rimodellamento neuronale dopo una lesione e durante la neurodegenerazione. Rtn4/Nogo del topo è quindi ampiamente studiato in modelli di controllo della crescita assonale, segnalazione associata alla mielinizzazione e risposte allo stress accoppiate alla struttura del RE.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nogo (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rtn4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rtn4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rtn4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nogo.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rtn4 per lo studio della segnalazione di Nogo, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rtn4 critici per la funzione di Nogo
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rtn4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nogo CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nogo CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rtn4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nogo Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nogo (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rtn4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rtn4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.