NMDAε4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420692
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NMDAε4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NMDAε4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NMDAε4 Anticorpo (G-10): sc-17822
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NMDAε4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420692 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Grin2d codifica, no camundongo, a subunidade do receptor NMDA NMDAε4 (GluN2D), um componente de canal iônico ativado por glutamato que molda a transmissão sináptica excitatória por meio do influxo de Ca²⁺ dependente de voltagem e de ligante. A incorporação de NMDAε4 influencia a cinética do receptor e a sensibilidade ao Mg²⁺, modulando assim a plasticidade sináptica, a expressão gênica dependente de atividade e o desenvolvimento de redes neurais. A sinalização do receptor NMDA interage com CaMK/CREB e outras vias dependentes de cálcio que conectam a atividade sináptica a programas de transcrição e à maturação de circuitos. Alterações na função de NMDAε4 ou na composição de subunidades são frequentemente estudadas no contexto de fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, bem como de suscetibilidade a crises convulsivas e de paradigmas de estresse excitatotóxico.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NMDAε4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Grin2d em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Grin2d, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Grin2d na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NMDAε4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Grin2d para a investigação da sinalização de NMDAε4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Grin2d críticos para a função NMDAε4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Grin2d para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NMDAε4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NMDAε4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Grin2d. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NMDAε4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NMDAε4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Grin2d para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Grin2d definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.