NMDAε1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420689-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NMDAε1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase NMDAε1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase NMDAε1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Grin2a. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NMDAε1 Anticorpo (E-4): sc-515148
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NMDAε1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-420689-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAε1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-420689-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Grin2a codifica a subunidade ε1 (NR2A) do recetor NMDA, um componente de canal iónico ativado por glutamato que molda a transmissão sináptica através de um influxo de Ca²⁺ dependente da atividade. Os recetores NMDA que contêm NR2A são centrais para a neurotransmissão excitatória, a plasticidade sináptica e o refinamento dos circuitos neuronais, acoplando a ativação do recetor a sinalização a jusante por CaMK/CREB, vias MAPK/ERK e programas de transcrição que regulam a aprendizagem e a memória. No cérebro de rato, o GRIN2A ajuda a ajustar a cinética do recetor e a maturação sináptica, influenciando o equilíbrio entre excitação e inibição. A desregulação da sinalização GRIN2A/recetor NMDA tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e relacionados com crises convulsivas em modelos experimentais, sustentando a sua utilização em estudos mecanísticos da cognição e da excitabilidade das redes neuronais.
NMDAε1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Grin2a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Grin2a. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Grin2a. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Grin2a interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.