NMDAε1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400963-NIC

GRIN2A は、ヒト NMDA 受容体サブユニットである NMDAε1（GluN2A）をコードします。NMDAε1 はグルタミン酸作動性イオンチャネルの構成要素で、GluN1 と会合して受容体を形成し、興奮性神経伝達時の Ca²⁺ 流入を担います。NMDAε1 を含む受容体は、長期増強（LTP）を含むシナプス可塑性を調節し、神経活動を CaMKII/CREB や MAPK/ERK、活動依存的な遺伝子発現プログラムといった下流のシグナル伝達経路に結び付けます。これらの過程を通じて、GRIN2A は神経回路の発達、学習・記憶、ならびに興奮性―抑制性バランスに影響します。GRIN2A の遺伝的多様性や発現制御の破綻は、神経発達異常やてんかん関連の表現型と関連付けられており、シナプスシグナル伝達やネットワーク興奮性の機序研究における重要な標的となっています。

NMDAε1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GRIN2A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GRIN2A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GRIN2Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GRIN2Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。