Plasmide Double Nickase (h) NMDAε1: sc-400963-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NMDAε1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NMDAε1 Double Nickase (h) et le plasmide NMDAε1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRIN2A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NMDAε1 Antibody (E-4): sc-515148
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NMDAε1 | sc-400963-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NMDAε1 | sc-400963-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2A code pour la sous-unité humaine du récepteur NMDA NMDAε1 (GluN2A), un composant de canal ionique activé par le glutamate qui s’assemble avec GluN1 pour former des récepteurs médiant l’entrée de Ca²⁺ lors de la neurotransmission excitatrice. Les récepteurs contenant NMDAε1 régulent la plasticité synaptique, notamment la potentialisation à long terme, et couplent l’activité neuronale à des voies de signalisation en aval telles que CaMKII/CREB, MAPK/ERK et des programmes d’expression génique dépendants de l’activité. Par ces processus, GRIN2A influence le développement des circuits, l’apprentissage et la mémoire, ainsi que l’équilibre excitation–inhibition. Les variations génétiques ou une expression dysrégulée de GRIN2A ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et liés à l’épilepsie, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques de la signalisation synaptique et de l’excitabilité des réseaux.
NMDAε1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRIN2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRIN2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRIN2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRIN2A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.