NIK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424749

概要

Map3k14 は、マウス細胞における非カノニカル NF-κB 経路の中枢的調節因子として機能する MAP3K である NF-κB 誘導キナーゼ（NIK）をコードします。NIK は、TNF 受容体スーパーファミリーの一部メンバーからのシグナルを統合し、IKKα を介して NF-κB2 の p100 を p52 へとプロセシングすることを促進することで、リンパ系器官形成、B 細胞成熟、樹状細胞機能、炎症性サイトカインネットワークを制御する転写プログラムを形成します。免疫恒常性の維持には NIK の安定性の厳密な制御が不可欠であり、NIK シグナルの破綻は、慢性炎症、免疫調節異常、ならびにリンパ系および間質系コンパートメントにおける腫瘍性プロセスと関連づけられています。NF-κB2/RelB の上流に位置するシグナル伝達ノードとして、NIK は自己免疫様表現型、感染に伴う免疫リモデリング、腫瘍関連の炎症性微小環境といった文脈でしばしば研究対象となります。

NIK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMap3k14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Map3k14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Map3k14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NIKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NIKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Map3k14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NIKの機能に不可欠なMap3k14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Map3k14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NIK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNIK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Map3k14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NIK HDRプラスミド（m）および NIK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMap3k14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMap3k14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。