NIK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400620-ACT

MAP3K14 codifica a quinase indutora de NF-κB (NIK), uma MAP3K central que impulsiona a via não canônica de NF-κB ao promover o processamento de p100 (NFKB2) em p52 dependente de IKKα e ao regular programas transcricionais mediados por RELB. A NIK integra sinais a jusante de receptores como BAFFR, CD40, LTβR e RANK para controlar a organogênese linfoide, a maturação de células B, a diferenciação de osteoclastos e a expressão de genes inflamatórios. A regulação rigorosa da estabilidade da NIK e da amplitude de sua sinalização é essencial para a homeostase imunológica, e a atividade desregulada de MAP3K14 tem sido associada a alterações na sinalização de NF-κB em distúrbios imunológicos e inflamatórios, bem como em contextos de neoplasias hematológicas. Como nó de sinalização, a NIK é frequentemente investigada para mapear o acoplamento entre receptores e transcrição, o crosstalk entre vias e respostas adaptativas ao estresse.

NIK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NIK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NIK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NIK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NIK em células tumorais com expressão de MAP3K14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.