Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2: sc-401641-NIC

CHRNB2 code la sous-unité β2 des récepteurs nicotiniques neuronaux de l’acétylcholine, des canaux ioniques activés par ligand qui s’assemblent en hétéropentamères avec d’autres sous-unités des nAChR afin d’assurer une transmission synaptique rapide. Lors de la liaison de l’acétylcholine ou de la nicotine, les récepteurs contenant β2 conduisent des cations, augmentant les concentrations intracellulaires de Na⁺ et de Ca²⁺ et se couplant à des réseaux de signalisation dépendants de l’activité qui modulent l’excitabilité, la libération de neurotransmetteurs et la plasticité synaptique. Cette signalisation cholinergique recoupe des voies impliquées dans l’homéostasie du calcium, la signalisation MAPK/ERK et le fonctionnement des circuits dopaminergiques. Des variations génétiques ou une expression altérée de CHRNB2 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, et ce gène est également étudié dans le contexte de la dépendance à la nicotine et de troubles liés aux crises d’épilepsie.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.