Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401641-NIC

CHRNB2 codifica a subunidade β2 dos receptores nicotínicos neuronais de acetilcolina, canais iônicos ativados por ligante que se montam como heteropentâmeros com outras subunidades de nAChR para mediar a transmissão sináptica rápida. Após a ligação de acetilcolina ou nicotina, receptores contendo β2 conduzem cátions, elevando os níveis intracelulares de Na⁺ e Ca²⁺ e acoplando-se a redes de sinalização dependentes da atividade que moldam a excitabilidade, a liberação de neurotransmissores e a plasticidade sináptica. Essa sinalização colinérgica se cruza com vias que regulam a homeostase do cálcio, a sinalização MAPK/ERK e a função de circuitos dopaminérgicos. Variações genéticas ou alterações na expressão de CHRNB2 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, e o gene também é estudado no contexto da dependência de nicotina e de distúrbios relacionados a crises convulsivas.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRNB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRNB2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRNB2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRNB2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.