Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1CRISPR激活质粒(h): sc-404205-ACT

CHRNB1 编码肌型烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）的 β1 亚基。该受体为配体门控离子通道，可与 α、δ 以及 ε/γ 等亚基组装，在神经肌肉接头介导快速突触传递。乙酰胆碱与受体结合后，受体通道开放，允许阳离子通透，将胆碱能信号与膜去极化、兴奋–收缩耦联以及活动依赖性的突触后结构重塑联系起来。CHRNB1 的功能与 agrin–LRP4–MuSK 信号轴以及由乙酰胆碱酯酶调控的突触间隙递质清除协同整合，共同维持终板稳定性与肌肉兴奋性。影响 nAChR 完整性的遗传或自身免疫异常与先天性肌无力综合征及重症肌无力相关机制有关，因此 CHRNB1 是研究神经肌肉传递缺陷与受体组装生物学的重要靶点。

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CHRNB1的表达。

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CHRNB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CHRNB1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CHRNB1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CHRNB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。