NFAT5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401359

概要

NFAT5（nuclear factor of activated T cells 5、別名TonEBP）はRelファミリーに属する転写因子であり、適合溶質（compatible osmolyte）の蓄積に関与するトランスポーターや酵素などの浸透圧保護遺伝子プログラムを制御することで、高張性ストレスに対する細胞の適応を統括します。免疫系および上皮系の文脈では、NFAT5はサイトカイン産生、マクロファージの極性化、リンパ球機能に影響を与え、浸透圧の感知を炎症シグナルや細胞生存経路と結び付けます。NFAT5活性はMAPKやカルシウム依存性のシグナル伝達ネットワークとも交差し、ストレス下でのタンパク質恒常性や細胞容積制御の維持にも寄与します。NFAT5シグナルの異常は、炎症性疾患、腎髄質の生理機能、腫瘍微小環境におけるストレス応答などと関連づけられており、ストレス適応と免疫制御の機序研究において重要な標的です。

NFAT5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNFAT5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NFAT5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NFAT5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NFAT5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NFAT5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NFAT5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NFAT5の機能に不可欠なNFAT5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NFAT5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NFAT5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNFAT5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NFAT5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NFAT5 HDRプラスミド（h）および NFAT5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNFAT5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNFAT5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。