Plasmide CRISPR/Cas9 KO neuropilin-1 (m): sc-421964
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- neuropilin-1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique neuropilin-1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: neuropilin-1 Antibody (A-12): sc-5307
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO neuropilin-1 (m) | sc-421964 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Nrp1** code la neuropiline‑1, un co‑récepteur transmembranaire multifonctionnel qui se lie aux sémaphorines de classe 3 et aux ligands de la famille du VEGF afin de moduler le guidage axonal, le bourgeonnement angiogénique et le comportement des cellules « tip » endothéliales. La neuropiline‑1 coordonne la signalisation avec VEGFR2, les plexines et les intégrines, influençant la dynamique du cytosquelette, la migration cellulaire et la perméabilité vasculaire via des voies comprenant les réseaux PI3K/AKT, MAPK/ERK et des GTPases Rho. Dans les compartiments immunitaires et stromaux, NRP1 contribue au trafic cellulaire et au remodelage tissulaire, ce qui l’associe aux microenvironnements inflammatoires et aux processus du développement. Une activité dérégulée de NRP1 a été liée à une organisation vasculaire anormale et à l’angiogenèse associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée en biologie neurovasculaire et des microenvironnements.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO neuropilin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nrp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nrp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nrp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine neuropilin-1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nrp1 pour l'étude de la signalisation de neuropilin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nrp1 essentiels à la fonction de neuropilin-1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nrp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le neuropilin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le neuropilin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nrp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le neuropilin-1 plasmide HDR (m) et le neuropilin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nrp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nrp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.