neuropilin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421964

概要

マウスNrp1はニューロピリン1（neuropilin-1）をコードしており、クラス3セマフォリンおよびVEGFファミリーリガンドに結合する多機能な膜貫通型の共受容体である。ニューロピリン1は、軸索誘導、血管新生におけるスプラウティング、ならびに内皮先端細胞（tip cell）の挙動を調節する。さらに、VEGFR2、プレキシン、インテグリンとのシグナル伝達を協調し、PI3K/AKT、MAPK/ERK、Rho GTPaseネットワークなどの経路を介して、細胞骨格ダイナミクス、細胞移動、血管透過性に影響を与える。免疫系および間質系のコンパートメントにおいても、NRP1は細胞のトラフィッキングや組織リモデリングに関与し、炎症性微小環境や発生過程との関連が示されている。NRP1活性の異常は、異常な血管パターニングや腫瘍関連血管新生と関連づけられており、神経血管生物学および微小環境研究で頻繁に解析対象となる分子である。

neuropilin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNrp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nrp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nrp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、neuropilin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、neuropilin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nrp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• neuropilin-1の機能に不可欠なNrp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nrp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• neuropilin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびneuropilin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nrp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  neuropilin-1 HDRプラスミド（m）および neuropilin-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNrp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNrp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。