Plasmide CRISPR d'Activation (h) neuroglobin: sc-401696-ACT

Le gène humain **NGB** code la neuroglobine, une globine liant l’oxygène, enrichie dans les neurones, qui soutient l’adaptation cellulaire à l’hypoxie et au stress oxydatif. La neuroglobine est impliquée dans le maintien de la fonction mitochondriale et de l’homéostasie rédox, avec des rôles rapportés dans la modulation de la gestion des espèces réactives de l’oxygène et de la signalisation liée à l’oxyde nitrique. Par ces mécanismes, **NGB** relie la disponibilité en oxygène au métabolisme neuronal et aux voies de réponse au stress qui influencent la survie en conditions ischémiques ou inflammatoires. Une expression altérée de la neuroglobine a été associée à une susceptibilité à la neurodégénérescence et à des modèles de lésion cérébrovasculaire, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la résilience neuronale.

neuroglobin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NGB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

neuroglobin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NGB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NGB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de neuroglobin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NGB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de neuroglobin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie neuroglobin dans les cellules tumorales présentant une expression de NGB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.