Plasmide Double Nickase (h) Neurofibromin 2/NF2/Merlin: sc-400504-NIC

NF2 code la neurofibromine 2 (Merlin), un adaptateur membrane–cytosquelette qui intègre les signaux provenant des jonctions cellule–cellule et du cortex d'actine afin de limiter la prolifération et de maintenir l'architecture épithéliale. Merlin agit comme suppresseur de tumeur en régulant l'inhibition de contact et en modulant des voies telles que Hippo–YAP/TAZ, la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et la dynamique du cytosquelette, qui influencent la migration et la signalisation mécanique. La perte ou l'inactivation de NF2 perturbe ces réseaux de contrôle de la croissance, favorisant une entrée aberrante dans le cycle cellulaire et une signalisation dépendante de l'adhérence altérée. Le dysfonctionnement de NF2 est fortement associé à la neurofibromatose de type 2 et aux tumeurs déficientes en Merlin, telles que les schwannomes et les méningiomes, ce qui en fait un nœud clé pour l'étude de la régulation de la croissance et de la mécanotransduction dans les cellules humaines.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NF2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.