Neuro D CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400375-ACT

NEUROD1はNeuro Dをコードしており、Neuro Dは塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写因子として、神経系および内分泌系の系譜における細胞運命の決定と終末分化を駆動します。Neuro Dは、神経細胞の成熟、シナプス機能、膵島の発生に関わる遺伝子ネットワークを制御し、発生シグナル伝達経路の下流にある転写プログラムを統合的に調整します。ヒト細胞では、NEUROD1の発現量や制御機構の変化が神経発達に関する表現型や内分泌分化の異常と関連づけられており、系譜コミットメントと転写回路を研究するうえで有用な結節点となります。NEUROD1を実験的に操作することで、分化状態、クロマチン依存的な遺伝子制御、細胞アイデンティティの維持を解析するための扱いやすいアプローチが得られます。

Neuro D CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NEUROD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Neuro D CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NEUROD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNEUROD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Neuro Dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNEUROD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNeuro D依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNEUROD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNeuro D経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。