Neu1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401488

概要

NEU1はリソソーム局在性ノイラミニダーゼ1（Neu1）をコードしており、Neu1は糖タンパク質や糖脂質の末端シアル酸を除去するシアリダーゼとして、リソソームでの異化代謝および細胞表面受容体のターンオーバーを調節します。Neu1は、保護タンパク質／カテプシンA複合体と協調して機能し、リソソーム酵素活性の維持に寄与するとともに、エンドサイトーシス輸送やオートファジー連関分解にも影響を与えます。膜タンパク質や分泌タンパク質のシアリル化状態を調節することにより、Neu1は免疫シグナル伝達、細胞接着、細胞外マトリックスのリモデリングに影響します。NEU1活性の制御破綻は、リソソーム蓄積症に関連する病態に加え、神経炎症や腫瘍関連シグナル伝達ネットワークなどのより広範な過程にも関与するとされ、糖鎖—リソソーム恒常性の機構研究において重要な標的となっています。

Neu1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNEU1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NEU1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NEU1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Neu1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Neu1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NEU1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Neu1の機能に不可欠なNEU1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NEU1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Neu1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNeu1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NEU1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Neu1 HDRプラスミド（h）および Neu1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNEU1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNEU1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。