neogenin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401204-NIC

O NEO1 humano codifica a neogenina, um recetor transmembranar de orientação da superfamília das imunoglobulinas que se liga a netrinas e a moléculas repulsivas de orientação (RGMs) para coordenar a navegação axonal, a migração neuronal e a morfogénese dos tecidos. A sinalização da neogenina interage com vias de remodelação do citoesqueleto e de adesão, podendo modular programas de desenvolvimento através de comunicação cruzada entre recetores e de regulação dependente do contexto da sobrevivência e da diferenciação celular. Para além do sistema nervoso, o NEO1 participa na organização epitelial e no desenvolvimento vascular e esquelético, ligando gradientes de sinais de orientação ao movimento polarizado e às interações célula–célula. Alterações na expressão de NEO1 ou desequilíbrios na via têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e à biologia tumoral, tornando-o relevante para estudos mecanísticos da sinalização de orientação e do controlo do estado celular.

neogenin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NEO1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NEO1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NEO1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NEO1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.