Plasmide Double Nickase (h) neogenin: sc-401204-NIC

Le gène humain NEO1 code la néogénine, un récepteur transmembranaire de guidage appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui se lie aux nétrines et aux molécules de guidage répulsives afin de coordonner la navigation axonale, la migration neuronale et la morphogenèse tissulaire. La signalisation de la néogénine s’articule avec le remodelage du cytosquelette et les voies d’adhérence, et peut moduler les programmes du développement via des interactions croisées entre récepteurs et une régulation dépendante du contexte de la survie et de la différenciation cellulaires. Au-delà du système nerveux, NEO1 contribue à l’organisation épithéliale ainsi qu’au développement vasculaire et squelettique, reliant des gradients de signaux de guidage aux mouvements polarisés et aux interactions cellule–cellule. Une expression altérée de NEO1 ou un déséquilibre de sa voie a été associé à des phénotypes neurodéveloppementaux et à la biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation de guidage et du contrôle des états cellulaires.

neogenin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.