Nek1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421852

概要

Nek1（NIMA関連キナーゼ1）はセリン／スレオニンキナーゼであり、細胞周期制御の重要な側面、中心体および繊毛の恒常性、ならびに微小管関連プロセスを統合的に調節します。マウス細胞では、Nek1はDNA損傷シグナル伝達と修復に関与することが示されており、チェックポイントおよび修復経路の制御を通じてゲノム安定性に寄与します。さらに、その機能は繊毛形成や細胞骨格の構築とも交差しており、Nek1の活性を発生や組織維持のプログラムと結び付けています。Nek1関連経路の制御異常は、繊毛に関連する病態生物学や神経変性に関係する機序にも関与するとされており、ストレス応答や細胞構造に関する表現型を解析するための有用な標的となります。

Nek1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNek1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nek1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nek1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nek1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nek1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nek1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nek1の機能に不可欠なNek1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nek1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nek1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNek1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nek1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nek1 HDRプラスミド（m）および Nek1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNek1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNek1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。