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NDUFA6CRISPR激活质粒(h) | sc-405991-ACT | 20 µg | $397.00 |
NDUFA6 编码线粒体呼吸链复合体 I(NADH:泛醌氧化还原酶)的一个小型辅助亚基,可支持复合体 I 的组装以及在氧化磷酸化过程中复合体内的电子传递。通过参与 NADH 氧化并维持线粒体质子梯度,NDUFA6 影响 ATP 生成、氧化还原稳态以及下游代谢信号传导。复合体 I 各组分的扰动可促进线粒体功能障碍、活性氧(ROS)处理能力改变,并引发中心碳代谢的代偿性重编程。作为一种核编码的复合体 I 相关因子,NDUFA6 与线粒体生物能量学研究以及复合体 I 相关线粒体疾病表型机制的探索密切相关。
NDUFA6 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NDUFA6的表达。
NDUFA6 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的NDUFA6基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于NDUFA6转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性NDUFA6表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的NDUFA6位点,并能够研究内源性位点上依赖于NDUFA6的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NDUFA6表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NDUFA6通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。