NCOAT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429251

Visão geral

Mgea5 codifica a NCOAT (também conhecida como O‑GlcNAcase), uma enzima-chave que remove O‑β‑N‑acetilglucosamina ligada (O‑GlcNAc) de resíduos de serina e treonina em proteínas nucleares e citoplasmáticas. Em conjunto com a O‑GlcNAc transferase, a NCOAT regula o ciclo dinâmico de O‑GlcNAc, que integra a detecção de nutrientes com a sinalização dependente de fosforilação, influenciando a transcrição, a progressão do ciclo celular, a proteostase e as respostas ao estresse. A atividade da NCOAT impacta vias como a sinalização de insulina/AKT, a regulação da cromatina e o controle de qualidade proteica ao modular os níveis de O‑GlcNAc em fatores de transcrição, quinases e proteínas do citoesqueleto. A desregulação da homeostase de O‑GlcNAc tem sido associada a fenótipos ligados a metabolismo e neurodegeneração, tornando Mgea5 um alvo útil em modelos murinos de sinalização e regulação epigenética.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NCOAT (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mgea5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mgea5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mgea5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NCOAT.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mgea5 para a investigação da sinalização de NCOAT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mgea5 críticos para a função NCOAT
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mgea5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NCOAT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NCOAT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mgea5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NCOAT Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NCOAT (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mgea5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mgea5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.