NALP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402588-NIC

ヒトNLRP1は、細胞ストレスや病原体関連シグナルに応答してインフラマソームの組み立てを開始（核形成）する、ヌクレオチド結合型ロイシンリッチリピート受容体であるセンサータンパク質NALP1をコードしている。活性化されると、NALP1はカスパーゼ1の活性化を促進し、IL‑1βおよびIL‑18の成熟を誘導することで、自然免疫による検知をパイロトーシスのシグナル伝達および炎症性サイトカイン放出へと結び付ける。この経路は、NF‑κBによるプライミング、プロテオスタシス監視、ならびに上皮および免疫の恒常性を形作る細胞死チェックポイントとも交差する。NLRP1活性の破綻は炎症性・自己免疫性の表現型と関連づけられており、バリア組織の炎症やストレス誘導性の自然免疫シグナル伝達の文脈で頻繁に研究されている。

NALP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NLRP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NLRP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NLRP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NLRP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。