Particules Lentivirales d'Activation (h) NAG: sc-412223-LAC

NBAS code la protéine « neuroblastoma amplified sequence », un grand facteur cytosolique qui participe au transport rétrograde du Golgi vers le réticulum endoplasmique (RE) via son association avec le complexe d’arrimage NRZ (NBAS–RINT1–ZW10) et la coordination de la capture et de la fusion des vésicules. En contribuant à l’homéostasie du RE et au contrôle qualité des protéines, NBAS influence l’intégrité de la voie sécrétoire et les réponses cellulaires au stress de protéostasie. Des variations génétiques de NBAS ont été associées à des phénotypes multisystémiques comprenant des dysfonctionnements hépatiques récurrents et des anomalies liées au système immunitaire, ce qui souligne son intérêt pour l’étude du stress du RE, du transport intracellulaire et de la vulnérabilité des tissus aux agressions protéotoxiques.

Les particules d'activation lentivirales NAG (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NBAS dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NAG (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NBAS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NAG. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NBAS ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.