Particules Lentivirales d'Activation (h) N4BP2: sc-412585-LAC

N4BP2 (NEDD4 binding protein 2) code une grande protéine intracellulaire impliquée dans la signalisation dépendante de l’ubiquitine via des interactions avec les ligases E3 ubiquitine de la famille NEDD4. Les fonctions décrites relient N4BP2 à la régulation du renouvellement et du trafic des protéines, avec des effets en aval sur l’homéostasie cellulaire, les réponses au stress et les réseaux de transduction du signal qui reposent sur une ubiquitination finement contrôlée. Dans les contextes immunitaires et hématopoïétiques, l’expression de N4BP2 a été associée à la modulation de la signalisation inflammatoire ainsi qu’à des processus de régulation de l’ARN et des protéines, suggérant un rôle dans l’orchestration des transitions d’état cellulaire. Les composants de la voie de l’ubiquitine dont la régulation est perturbée, y compris les facteurs interagissant avec NEDD4 tels que N4BP2, sont fréquemment étudiés pour leurs liens potentiels avec la biologie du cancer, la neurobiologie et les mécanismes des maladies à composante immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales N4BP2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de N4BP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales N4BP2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription N4BP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de N4BP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif N4BP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.