Plasmide Double Nickase (h) N-cadherin: sc-400109-NIC

CDH2 code pour le récepteur humain d'adhésion cellule–cellule N‑cadhérine, une cadhérine dépendante du calcium qui stabilise les jonctions d'adhérence via des interactions homophiles et son couplage aux caténines ainsi qu'au cytosquelette d'actine. La N‑cadhérine régule la morphogenèse tissulaire, le développement neuronal et la migration collective des cellules en coordonnant le remodelage des jonctions, la mécanotransduction et les programmes de polarité. Elle interagit avec des voies telles que la signalisation β‑caténine/Wnt, la dynamique du cytosquelette pilotée par les GTPases de la famille Rho et la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, influençant ainsi la prolifération et la motilité. Une expression ou une localisation dérégulée de CDH2 est associée à une plasticité épithélio‑mésenchymateuse altérée, à un comportement invasif et à des modifications, pertinentes pour la maladie, de la biologie des cellules vasculaires et neurales.

N-cadherin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDH2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDH2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDH2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.