MTA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401698-ACT

A MTA2 humana (metastasis associated 1 family member 2) é um componente central do complexo NuRD (remodelação de nucleossomos e desacetilação) que integra a remodelação de cromatina dependente de ATP com a desacetilação de histonas para regular programas de repressão transcricional. Por meio de interações com HDAC1/2, CHD3/4 e proteínas de ligação a metil-CpG, a MTA2 contribui para o controle epigenético da progressão do ciclo celular, das respostas a danos no DNA e da diferenciação específica de linhagem. Alterações na expressão de MTA2 e na atividade do NuRD têm sido associadas a estados transcricionais oncogênicos, à transição epitélio–mesênquima e a fenótipos invasivos em múltiplos contextos tumorais, tornando-a um foco frequente em estudos de mecanismos de doença mediados pela cromatina. A regulação, dependente de MTA2, de redes gênicas também se cruza com vias de sinalização que moldam a proliferação e a adaptação ao estresse, sustentando seu uso como um nó para dissecar a plasticidade transcricional.

MTA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MTA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MTA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MTA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MTA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MTA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MTA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MTA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MTA2 em células tumorais com expressão de MTA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.