MT-MMP-4 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405757-ACT-2

ヒトMMP17はMT-MMP-4（マトリックスメタロプロテイナーゼ17）をコードしており、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の膜結合メタロプロテアーゼとして、細胞周囲でのタンパク質分解（ペリセルラー・プロテオリシス）を介して細胞外マトリックスのリモデリングおよび細胞—マトリックス相互作用を制御する。MT-MMP-4はマトリックス成分をプロセシングし、生理活性をもつシグナル分子の利用可能性を調節することで、組織の形態形成、細胞移動、炎症性微小環境のダイナミクスに関連する経路に影響を及ぼす。MMP17活性の制御異常は、腫瘍浸潤や線維化・炎症過程などの病的リモデリング状況と関連しており、プロテアーゼのバランス変化が細胞外構造とシグナル伝達を再編し得る。MMP17を標的とした遺伝子編集および機能ゲノミクス研究は、ヒト細胞およびオルガノイドモデルにおいて、膜係留型プロテアーゼの制御機構、基質特異性、ならびに細胞外マトリックス依存的な表現型の機序解析を可能にする。

MT-MMP-4 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MMP17の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MT-MMP-4 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における MMP17 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMMP17転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MT-MMP-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMMP17遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMT-MMP-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMMP17発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMT-MMP-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。