MRP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400456-ACT

ABCC1 codifica a proteína humana associada à resistência a múltiplos fármacos 1 (MRP1), um transportador da família ABC (ATP-binding cassette) que exporta uma ampla gama de ânions orgânicos, conjugados de xenobióticos e metabólitos endógenos através da membrana plasmática. A MRP1 acopla a hidrólise de ATP ao efluxo de conjugados de glutationa, glucuronídeo e sulfato, influenciando a homeostase redox celular, o processamento de mediadores inflamatórios e a desintoxicação farmacológica. Ao modular a disponibilidade intracelular de substratos, a atividade de ABCC1 se conecta a respostas ao estresse oxidativo e a vias do metabolismo de xenobióticos. A expressão desregulada de ABCC1/MRP1 tem sido associada a alterações na disposição de fármacos e a fenótipos de resistência em câncer, bem como a contextos de doença que envolvem transporte em barreiras e inflamação crônica.

MRP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRP1 em células tumorais com expressão de ABCC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.