MRNIP Double Nickaseプラスミド (h): sc-412131-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MRNIP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MRNIPダブルニカースプラスミド（h）およびMRNIPダブルニカースプラスミド（h2）は、MRNIPを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MRNIP 抗体 (H-11): sc-390012
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MRNIP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-412131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRNIP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-412131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MRNIP（MRE11-RAD50-NBS1相互作用タンパク質）は核内因子であり、DNA二本鎖切断の検出と処理を担うMRN複合体と機能的に連携することで、DNA損傷応答に関与すると考えられています。MRN依存的なシグナル伝達や末端切除（end resection）の動態を調節することにより、MRNIPは複製ストレス下でのゲノム安定性に寄与し、チェックポイント活性化や修復経路の選択にも影響します。MRN経路の構成要素の破綻は、一般に染色体不安定性の表現型や遺伝毒性ストレス因子に対する感受性の変化と広く関連しており、そのためMRNIPはDNA修復ネットワークの構成を研究する上で有用な結節点となります。MRNIPに関する研究は、多様な疾患状況で見られる変異の蓄積、異数性、細胞周期異常の根底にある機構の理解にも関連します。
MRNIP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MRNIP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MRNIP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MRNIPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MRNIPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。