MRGX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414107-ACT

MRGPRX2 codifica o recetor humano acoplado à proteína G relacionado com Mas X2 (MRGX2), um GPCR altamente enriquecido em mastócitos que medeia a ativação independente de IgE em resposta a diversos péptidos catiônicos e pequenas moléculas. A ligação ao recetor desencadeia a sinalização Gαq/PLC, a mobilização intracelular de Ca2+ e programas transcricionais a jusante ligados a MAPK e NF-κB, que modulam a degranulação e a libertação de mediadores pró-inflamatórios. O MRGX2 tem sido implicado na comunicação neuroimune e em reações pseudoalérgicas, e a sua desregulação é estudada no contexto de urticária crónica, inflamação atópica e respostas imediatas induzidas por fármacos semelhantes a hipersensibilidade. Estas propriedades tornam o MRGPRX2 um alvo útil para investigar limiares de ativação de mastócitos, sinalização enviesada do recetor e crosstalk entre vias inflamatórias.

MRGX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MRGPRX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRGX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MRGPRX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MRGPRX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRGX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MRGPRX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRGX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRGX2 em células tumorais com expressão de MRGPRX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.