Mrf-1CRISPR激活质粒(h2): sc-406689-ACT-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Mrf-1 CRISPER激活质粒（h2）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Mrf-1 CRISPR 激活质粒 (h2)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Mrf-1 CRISPR 激活质粒 (h2) 和 Mrf-1 CRISPR 激活质粒 (h22) 编码的 gRNA 分别针对 ARID5A 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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Mrf-1CRISPR激活质粒(h2) | sc-406689-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人类ARID5A（Mrf-1）基因编码一种含AT富集相互作用结构域的RNA结合调控因子，可通过稳定包括IL6在内的特定细胞因子mRNA来调节炎症相关基因表达，从而塑造先天与适应性免疫反应；ARID5A整合TLR/IL-1R及NF-κB通路下游信号，并拮抗由RNase介导的mRNA降解程序，以控制免疫激活的强度与持续时间。ARID5A活性失调与异常细胞因子产生及免疫驱动的病理过程相关，常见于自身免疫、慢性炎症以及肿瘤相关炎症等情境；对ARID5A进行基因编辑有助于在人体细胞模型中开展转录后调控机制研究、解析免疫细胞分化与激活过程，并对细胞因子网络通路进行绘制与映射。
Mrf-1 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ARID5A的表达。
Mrf-1 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ARID5A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ARID5A转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Mrf-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ARID5A位点，并能够研究内源性位点上依赖于Mrf-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ARID5A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Mrf-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。