Plasmide CRISPR d'Activation (h2) Mrf-1: sc-406689-ACT-2

Le gène humain ARID5A (Mrf-1) code un régulateur liant l’ARN contenant un domaine d’interaction riche en AT, qui module l’expression des gènes inflammatoires en stabilisant de manière sélective les ARNm de cytokines, notamment celui de l’IL-6, façonnant ainsi les réponses immunitaires innées et adaptatives. ARID5A intègre des signaux en aval des voies TLR/IL-1R et NF-κB et contrebalance des programmes de dégradation médiés par des RNases afin de contrôler l’amplitude et la durée de l’activation immunitaire. Une activité dérégulée d’ARID5A a été associée à une production aberrante de cytokines et à des pathologies d’origine immunitaire dans des contextes tels que l’auto-immunité, l’inflammation chronique et l’inflammation associée aux tumeurs. L’édition du gène ARID5A soutient des études mécanistiques du contrôle post-transcriptionnel, de la différenciation et de l’activation des cellules immunitaires, ainsi que la cartographie des voies des réseaux de cytokines dans des modèles cellulaires humains.

Mrf-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARID5A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mrf-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARID5A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARID5A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mrf-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARID5A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mrf-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mrf-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARID5A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.