Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MPST Double Nickaseプラスミド (h): sc-401643-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MPST Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MPSTダブルニカースプラスミド（h）およびMPSTダブルニカースプラスミド（h2）は、MPSTを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MPST 抗体 (H-11): sc-376168
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MPST Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401643-NIC | 20 µg | $410.00 |
MPST（3-メルカプトピルビン酸硫黄転移酵素）は、ミトコンドリアおよび細胞質に局在する硫黄転移酵素であり、パースルフィド（過硫化物）転移反応を触媒して、システイン由来基質からの内因性の硫化水素およびポリスルフィド産生に寄与する。細胞内のレドックス恒常性やタンパク質のパースルフィド化を制御することを通じて、MPSTは酸化ストレス応答、ミトコンドリアのバイオエナジェティクス（エネルギー代謝）、および含硫アミノ酸代謝に影響を及ぼす。MPST活性の変化は、活性酸素種（ROS）の処理異常や代謝リモデリングと関連づけられており、神経変性、心血管系のストレス応答、ならびに炎症関連シグナル伝達の研究において重要である。さらにMPSTの機能は、フェロトーシス感受性やチオール依存性の解毒経路という観点からも検討されており、硫黄転移反応が脂質過酸化に対する細胞の脆弱性を調節し得る。
MPST ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MPST 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MPST内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MPSTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MPSTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。