mPRδ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413309-ACT

PAQR6は膜型プロゲステロン受容体デルタ（mPRδ）をコードしており、細胞膜における迅速な非ゲノム性ステロイドシグナル伝達に関与するとされる、プロゲスチン／adipoQ受容体ファミリーの一員です。mPRδは、Gタンパク質共役型シグナル伝達などのセカンドメッセンジャー経路の調節に関連し、カルシウムフラックス、cAMP動態、ならびに下流のキナーゼ活性に影響を与えることで、増殖・遊走・ストレス応答といった細胞状態の意思決定を形作り得ます。ヒト組織においてPAQR6の発現は、内分泌応答性の生物学や、代謝制御および炎症プロセスと交差する膜起点のプロゲステロンシグナル伝達ネットワークと関連づけられてきました。PAQR6／mPRδシグナルの破綻（ディスレギュレーション）は、ホルモン関連の病態生理の文脈で検討されており、がん生物学や生殖器系機能に関わる細胞プログラムに寄与し得る要因としても研究されています。

mPRδ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAQR6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mPRδ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAQR6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAQR6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mPRδの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAQR6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmPRδ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAQR6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmPRδ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。