mPRα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402143-ACT

PAQR7 codifica o receptor de progesterona de membrana alfa (mPRα), um membro da família PAQR implicado na sinalização rápida e não genômica da progesterona nas membranas celulares. O mPRα tem sido associado à modulação de vias de sinalização acopladas à proteína G, incluindo a dinâmica de AMPc e vias de quinases a jusante que influenciam programas de proliferação, diferenciação e sobrevivência celular. Em tecidos humanos, a expressão de PAQR7 está relacionada à regulação endócrina e a estados celulares responsivos a esteroides, o que o torna relevante para o estudo de redes transcricionais dependentes de hormônios e da comunicação cruzada entre sinalização iniciada na membrana. Vias desreguladas de sinalização da progesterona envolvendo PAQR7 têm sido investigadas no contexto da biologia reprodutiva e de mecanismos de doenças associadas a hormônios, sustentando seu uso como alvo de pesquisa em estudos de sinalização celular e genômica funcional.

mPRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAQR7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mPRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAQR7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAQR7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mPRα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAQR7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mPRα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mPRα em células tumorais com expressão de PAQR7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.