MOX-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403723-ACT

O gene humano **MEOX2** codifica o fator de transcrição homeobox **MOX-2**, um regulador nuclear de programas de expressão gênica do desenvolvimento que influenciam a diferenciação mesenquimal, o comportamento de células vasculares e o padrão de organização dos tecidos. O MOX-2 integra redes transcricionais que controlam a especificação de linhagens e a remodelação da matriz extracelular, com funções descritas na biologia de células endoteliais e de músculo liso e um controle dependente do contexto de genes do ciclo celular e de resposta ao estresse. Alterações na atividade de MEOX2 têm sido associadas à disfunção vascular e a estados de diferenciação aberrantes, o que o torna relevante para estudos de angiogênese, remodelação semelhante à fibrose e desregulação do desenvolvimento. Como regulador transcricional, o MOX-2 é comumente investigado por meio de perfis de expressão e ensaios baseados em cromatina para mapear alvos a jusante e interações entre vias.

MOX-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MEOX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MOX-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MEOX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MEOX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MOX-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MEOX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MOX-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MOX-2 em células tumorais com expressão de MEOX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.