Mnk1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402417-ACT

ヒトのMKNK1は、MAPキナーゼ相互作用型セリン／スレオニンプロテインキナーゼ1（Mnk1）をコードしており、ERKおよびp38 MAPKシグナル伝達の下流エフェクターとして、細胞外からの刺激を翻訳制御へと結び付けます。Mnk1はeIF4Eをリン酸化し、キャップ依存的mRNA翻訳を調節することで、増殖・生存・炎症プログラムに関与する成長応答性／ストレス応答性転写産物の発現に影響を与えます。これらの経路を通じて、MAPK駆動のトランスラトーム再編が細胞状態の意思決定の変化に寄与する状況において、MKNK1はしばしば研究対象となっています。MKNK1–eIF4Eシグナルの破綻は、がん原性シグナルネットワークや免疫／炎症制御との関連が示されており、シグナルから翻訳への結合（カップリング）の機構研究に有用な結節点となります。

Mnk1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MKNK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mnk1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MKNK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMKNK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mnk1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMKNK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMnk1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMKNK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMnk1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。