Plasmide CRISPR d'Activation (h) MMP-10: sc-403174-ACT

La métalloprotéinase matricielle 10 (MMP-10 ; stromélysine-2) est une endopeptidase sécrétée, dépendante du zinc, qui remodèle la matrice extracellulaire en clivant les protéoglycanes, la laminine, la fibronectine et d’autres composants de la matrice, et peut activer d’autres MMP afin d’amplifier les cascades protéolytiques. Son activité influence l’adhésion et la migration cellulaires, la dynamique épithélio-mésenchymateuse et les programmes de réparation tissulaire, en intégrant les signaux extracellulaires aux voies de signalisation inflammatoire. L’expression de MMP-10 est fréquemment régulée en aval des voies des cytokines et des facteurs de croissance, notamment NF-κB et MAPK/AP-1, ce qui l’associe aux contextes de cicatrisation et de remodelage stromal. Une dérégulation de MMP-10 a été liée au renouvellement pathologique de la matrice observé dans divers troubles inflammatoires, des processus liés à la fibrose et le remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui étaye son utilisation comme marqueur mécanistique dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.

MMP-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMP-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMP-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMP-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMP-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.