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MMP-10CRISPR激活质粒(h) | sc-403174-ACT | 20 µg | $397.00 |
基质金属蛋白酶-10(MMP-10;基质溶解素-2)是一种分泌型、锌依赖性的内肽酶,可通过切割蛋白聚糖、层粘连蛋白、纤维连接蛋白及其他基质成分来重塑细胞外基质,并能激活其他MMP,从而放大蛋白水解级联反应。其活性会影响细胞黏附与迁移、上皮—间质动态变化以及组织修复程序,将细胞外线索与炎症信号整合起来。MMP-10的表达通常受细胞因子和生长因子通路的下游调控,包括NF-κB和MAPK/AP-1,因此与创伤愈合和基质/间质重塑等情境密切相关。MMP-10失调与多种疾病中观察到的病理性基质周转有关,涵盖炎症性疾病、纤维化相关过程以及肿瘤相关微环境重塑,因此可作为疾病相关模型中的机制性标志物。
MMP-10 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性的表达。
MMP-10 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MMP-10表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的位点,并能够研究内源性位点上依赖于MMP-10的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MMP-10通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。