MMD CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426581

概要

Mmdは、ゴルジ体およびエンドメンブレン系に豊富に存在する多回膜貫通型タンパク質MMDをコードしており、骨髄系系譜の成熟や自然免疫細胞の生物学と関連づけられています。研究からは、MMDが膜輸送やシグナル伝達出力の制御を通じて炎症応答の形成に関与することが示唆されており、マクロファージおよび関連細胞種におけるMAPK/ERK経路やサイトカイン関連経路とのつながりも報告されています。MMD発現の変化は免疫および腫瘍のさまざまな状況で報告されており、骨髄系プログラムが細胞ストレスや微小環境からのシグナルとどのように連関するかを検討するための機構的な結節点として有用であることを支持します。マウスモデルでは、MMDの攪乱は、治療的または臨床的な含意を導くことなく、系譜特異的シグナル伝達および臓器レベルの炎症表現型を解析するための手がかりとなります。

MMD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMmd遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mmd内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mmdのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MMDタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MMDシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mmd欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MMDの機能に不可欠なMmdエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mmdゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MMD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMMD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mmd遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MMD HDRプラスミド（m）および MMD HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMmdホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMmd標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。