MLK4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405976-ACT

MAP3K21は、上流のストレス刺激や増殖因子シグナルをMAPKシグナル伝達へと結び付ける、MAP3Kファミリーのセリン／スレオニンキナーゼであるヒトmixed lineage kinase 4（MLK4）をコードします。MLK4は、JNKおよびp38キナーゼカスケードの制御に関与するとともに、リン酸化に基づくシグナル伝達リレーを介して、増殖、分化、アポトーシスなどのより広範な細胞プログラムの調節に関与することが示唆されています。MAP3K21/MLK4を含むMAPK経路の配線（ネットワーク）変化は、複数の疾患状況にわたって観察される細胞内シグナル伝達の破綻と関連づけられており、経路マッピングや機能ゲノミクスにおける機序的ノードとしての利用を支持します。したがってMLK4を実験的に操作することは、キナーゼネットワーク動態、ストレスに対する転写応答、ならびにヒト細胞における文脈依存的なシグナルの可塑性を解明するうえで重要です。

MLK4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP3K21の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLK4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP3K21 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP3K21転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLK4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP3K21遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLK4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP3K21発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLK4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。