MLK2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406968-ACT

ヒトMAP3K10は、混合系譜キナーゼ2（mixed lineage kinase 2：MLK2）をコードしており、低分子GTPアーゼやストレスシグナルなどの上流からの刺激を統合して、リン酸化カスケードを伝達するMAPキナーゼキナーゼキナーゼ（MAP3K）である。MLK2はMAPKシグナル伝達、特にJNKおよびp38経路の主要な制御因子として働き、アポトーシス、炎症応答、神経分化を制御する転写プログラムを形成する。これらのシグナルノードを介して、MLK2は細胞骨格ダイナミクスや細胞のストレス適応にも影響し、がん生物学や神経変性疾患研究で頻繁に検討されるプロセスに関与する。MAP3K10活性の破綻は、ストレス応答性シグナルの異常や生存経路の変化と関連づけられており、経路の再配線（rewiring）の機序解明研究において重要である。

MLK2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP3K10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLK2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP3K10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP3K10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLK2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP3K10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLK2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP3K10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLK2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。