Plasmide Double Nickase (h) MKP-4: sc-405872-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MKP-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MKP-4 Double Nickase (h) et le plasmide MKP-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DUSP9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MKP-4 Antibody (D-3): sc-137010
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MKP-4 | sc-405872-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MKP-4 | sc-405872-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DUSP9 code la phosphatase à double spécificité 9 (MKP-4), une phosphatase des MAPK qui déphosphoryle les résidus phospho-thréonine et phospho-tyrosine des MAPK afin d’atténuer la signalisation des kinases. MKP-4 est impliquée dans la régulation de la dynamique des voies ERK et p38, modulant des réponses cellulaires telles que la prolifération, la différenciation et la signalisation du stress. Par un contrôle en rétroaction des cascades MAPK, DUSP9 influence les réseaux de signalisation inflammatoires et métaboliques, et a été étudiée dans des contextes où l’activité de la voie MAPK est modifiée, notamment dans des états de signalisation associés au cancer. Une expression ou une activité altérée de DUSP9 est donc pertinente pour analyser des phénotypes dépendants des MAPK et les mécanismes de compensation des voies dans les cellules humaines.
MKP-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DUSP9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DUSP9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DUSP9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DUSP9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.