Plasmide CRISPR/Cas9 KO mGluR-7 (h): sc-406953

Présentation

GRM7 code le récepteur métabotropique du glutamate 7 (mGluR-7), un RCPG de classe C qui se couple principalement aux protéines Gi/o afin de réduire l’activité de l’adénylate cyclase et de moduler la fonction des canaux ioniques. Enrichi au niveau des zones actives présynaptiques, mGluR-7 agit comme autorécepteur/hétéro-récepteur en atténuant la libération de neurotransmetteurs et en ajustant la transmission et la plasticité synaptiques via la signalisation cAMP/PKA et les voies MAPK/ERK en aval. En raison de son rôle dans la régulation de l’équilibre excitation–inhibition et de l’excitabilité des circuits, GRM7 est fréquemment étudié dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi que des mécanismes de susceptibilité aux crises et des comportements liés au stress. La signalisation humaine de mGluR-7 est également pertinente pour l’organisation synaptique et le remodelage dépendant de l’activité, ce qui en fait une cible utile pour l’exploration des voies de signalisation dans des modèles neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mGluR-7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRM7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRM7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRM7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mGluR-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRM7 pour l'étude de la signalisation de mGluR-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRM7 essentiels à la fonction de mGluR-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRM7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le mGluR-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le mGluR-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRM7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le mGluR-7 plasmide HDR (h) et le mGluR-7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRM7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRM7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.