MGAT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415617-ACT

O MOGAT3 humano (também referido como MGAT3) codifica uma monoacilglicerol aciltransferase que catalisa a acilação de monoacilglicerol para formar diacilglicerol, um intermediário-chave na biossíntese de triglicerídeos. Essa atividade enzimática conecta o remodelamento de glicerolipídios a redes metabólicas lipídicas mais amplas que influenciam a composição de membranas, a formação de gotículas lipídicas e o armazenamento de energia celular. Ao modular o diacilglicerol e os estoques lipídicos a jusante, o MGAT3 pode interagir com processos de sinalização sensíveis a segundos mensageiros lipídicos e a respostas ao estresse metabólico. A regulação alterada do metabolismo de glicerolipídios está associada a fenótipos de doenças metabólicas e a vias relevantes para dislipidemias, tornando o MGAT3 um alvo útil para estudos mecanísticos do processamento de lipídios em células humanas.

MGAT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MOGAT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MGAT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MOGAT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MOGAT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MGAT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MOGAT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MGAT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MGAT3 em células tumorais com expressão de MOGAT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.