MEK-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401688-ACT

MAP2K5 codifica a quinase da quinase de proteína ativada por mitógenos 5 (MEK-5), uma quinase de dupla especificidade que atua como o principal ativador a montante de ERK5 (MAPK7) no eixo de sinalização MEK5–ERK5. Essa via integra sinais de fatores de crescimento e de estresse para regular programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação, sobrevivência e dinâmica do citoesqueleto, com funções documentadas na biologia vascular e na migração celular. A sinalização MEK-5–ERK5 interage com o controle, dependente de MAPK, da expressão de genes de resposta imediata e pode influenciar respostas a estímulos oxidativos e inflamatórios. A desregulação da atividade de MAP2K5/ERK5 tem sido associada a alterações em contextos de sinalização oncogênica, fenótipos relacionados ao sistema cardiovascular e outras condições em que o redirecionamento de redes de MAPK contribui para estados celulares relevantes para a doença.

MEK-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP2K5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEK-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP2K5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP2K5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEK-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP2K5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEK-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEK-5 em células tumorais com expressão de MAP2K5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.