Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEK-5: sc-401688-ACT

MAP2K5 code pour la kinase kinase 5 des protéines kinases activées par les mitogènes (MEK‑5), une kinase à double spécificité qui constitue le principal activateur en amont d’ERK5 (MAPK7) dans l’axe de signalisation MEK5–ERK5. Cette voie intègre des signaux de facteurs de croissance et de stress afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation, la survie et la dynamique du cytosquelette, avec des rôles documentés dans la biologie vasculaire et la migration cellulaire. La signalisation MEK‑5–ERK5 recoupe le contrôle, dépendant des MAPK, de l’expression des gènes de réponse immédiate et peut moduler les réponses aux stimuli oxydatifs et inflammatoires. Une dérégulation de l’activité MAP2K5/ERK5 a été associée à des altérations de contextes de signalisation oncogénique, à des phénotypes liés au cardiovasculaire et à d’autres situations où le remodelage des réseaux MAPK contribue à des états cellulaires pertinents pour la maladie.

MEK-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP2K5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEK-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP2K5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP2K5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEK-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP2K5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEK-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEK-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP2K5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.