MDR1/ABCB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422215-ACT

O gene murino Abcb1b codifica o transportador de resistência a múltiplos fármacos MDR1/ABCB1, uma bomba de efluxo da família ABC (ATP-binding cassette) que limita o acúmulo intracelular de xenobióticos e metabólitos estruturalmente diversos. Ao acoplar a hidrólise de ATP à exportação de substratos, o MDR1 influencia barreiras farmacocinéticas e programas de desintoxicação celular, moldando processos como o transporte epitelial, a função de barreiras sangue–tecido e as respostas ao estresse diante de agressões tóxicas. Sua atividade se cruza com a sinalização inflamatória e metabólica por meio da regulação da exposição intracelular a lipídios sinalizadores e a agentes químicos ambientais, e é frequentemente estudada no contexto da disposição de fármacos e de fenótipos de resistência a múltiplos medicamentos. A expressão desregulada de MDR1/ABCB1 é relevante em modelos de doença refratária ao tratamento e em estudos mecanísticos da biodisponibilidade mediada por transportadores in vivo.

MDR1/ABCB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Abcb1b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MDR1/ABCB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Abcb1b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Abcb1b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MDR1/ABCB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Abcb1b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MDR1/ABCB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MDR1/ABCB1 em células tumorais com expressão de Abcb1b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.