MCPIP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401790-ACT

ZC3H12A codifica a MCPIP (também conhecida como Regnase-1), uma endorribonuclease ligante de RNA que limita a expressão de genes inflamatórios ao promover a degradação de mRNAs de citocinas e quimiocinas e ao modular a biogênese de microRNAs. A MCPIP integra sinais a jusante de receptores da imunidade inata e de vias de citocinas, incluindo as cascatas de NF-κB e MAPK, para moldar a ativação de macrófagos, as respostas de células T e a resolução da inflamação. Por meio da regulação da estabilidade de transcritos e de programas de diferenciação de células imunes, ZC3H12A está implicada na desregulação da homeostase imunológica observada em contextos de doenças autoimunes e inflamatórias crônicas. Sua atividade também se cruza com respostas ao estresse celular e com a sinalização relacionada à apoptose, tornando-a relevante para estudos de dano tecidual associado à inflamação e de interações entre tumor e sistema imune.

MCPIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZC3H12A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCPIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZC3H12A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZC3H12A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCPIP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZC3H12A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCPIP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCPIP em células tumorais com expressão de ZC3H12A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.