MCM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401980

概要

MCM5は、複製起点のライセンシングを担い、S期にプレ複製複合体およびCMG（CDC45–MCM–GINS）複合体の一部としてDNAの巻き戻しを駆動するMCM2–7ヘリカーゼの中核サブユニットをコードします。起点の発火と複製フォークの進行を協調させることで、MCM5はゲノム安定性に寄与し、異常なDNA合成を抑制するDNA損傷応答やチェックポイント経路とも連携します。MCMファミリータンパク質の発現や活性の異常は、多様ながんの文脈で観察される増殖能の亢進や複製ストレスのシグネチャーとしばしば関連しており、細胞周期およびゲノム維持の研究における機構的マーカーとしての有用性を支持しています。

MCM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMCM5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MCM5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MCM5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MCM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MCM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MCM5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MCM5の機能に不可欠なMCM5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MCM5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MCM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMCM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MCM5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MCM5 HDRプラスミド（h）および MCM5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMCM5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMCM5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。