Particules Lentivirales d'Activation (h) Mcl-1: sc-400079-LAC

MCL1 code pour Mcl-1, une protéine anti-apoptotique de la famille BCL-2, localisée principalement à la membrane externe de la mitochondrie, où elle freine la perméabilisation de cette membrane en séquestrant des facteurs pro-apoptotiques de type BH3-only et en inhibant l’activation de BAX/BAK. Son abondance est étroitement régulée par la signalisation des facteurs de croissance et par le stress cellulaire via des programmes transcriptionnels et une dégradation protéasomale rapide, faisant de Mcl-1 un nœud central qui intègre les signaux de survie à l’apoptose intrinsèque. MCL1 s’interface avec des voies telles que PI3K/AKT, MAPK/ERK et les réponses intégrées au stress, qui modulent les décisions de destin cellulaire en contexte de stress métabolique, génotoxique ou du réticulum endoplasmique (RE). Une expression dérégulée de MCL1 et une dépendance accrue à son égard sont fréquemment étudiées dans des modèles de cancers et d’hémopathies malignes, et une modification de l’« amorçage » apoptotique impliquant Mcl-1 est également pertinente pour les travaux sur l’homéostasie immunitaire et la biologie des lésions tissulaires.

Les particules d'activation lentivirales Mcl-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MCL1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Mcl-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MCL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Mcl-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MCL1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.