Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCAD Plasmide Double Nickase (h): sc-402708-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCAD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCAD Double Nickase Plasmid (h) e il MCAD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACADM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCAD Antibody (E-8): sc-271931
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCAD Plasmide Double Nickase (h) | sc-402708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCAD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACADM codifica l’acil-CoA deidrogenasi a catena media (MCAD), una flavoproteina mitocondriale che catalizza il primo passaggio di deidrogenazione degli acil-CoA degli acidi grassi a catena media durante la β-ossidazione. L’attività di MCAD sostiene la produzione di energia a partire dagli acidi grassi, contribuendo alla flessibilità metabolica durante il digiuno e in altri stati ad alta richiesta energetica, e si integra con il più ampio equilibrio redox mitocondriale e con la disponibilità di acetil-CoA. L’alterazione di ACADM è associata a una ridotta ossidazione degli acidi grassi e all’accumulo di acilcarnitine a catena media, una firma biochimica ampiamente utilizzata nella ricerca metabolica. ACADM/MCAD rappresenta quindi un nodo chiave per studiare il metabolismo mitocondriale, il sensing dei nutrienti e la segnalazione derivata dai lipidi in modelli cellulari umani.
MCAD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACADM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACADM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACADM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACADM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.