Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) MCAD: sc-402708-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MCAD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MCAD Double Nickase (h) et le plasmide MCAD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACADM. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MCAD Antibody (E-8): sc-271931
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MCAD | sc-402708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MCAD | sc-402708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACADM code la déshydrogénase des acyl-CoA à chaîne moyenne (MCAD), une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse la première étape de déshydrogénation des acyl-CoA d’acides gras à chaîne moyenne au cours de la β‑oxydation. L’activité de la MCAD soutient la production d’énergie à partir des acides gras, contribuant à la flexibilité métabolique pendant le jeûne et d’autres états à forte demande, et s’inscrit dans l’équilibre rédox mitochondrial plus global ainsi que dans l’approvisionnement en acétyl‑CoA. Une altération d’ACADM est associée à une oxydation des acides gras déficiente et à l’accumulation d’acylcarnitines à chaîne moyenne, une signature biochimique largement utilisée en recherche métabolique. ACADM/MCAD constitue donc un nœud clé pour étudier le métabolisme mitochondrial, la détection des nutriments et la signalisation dérivée des lipides dans des modèles de cellules humaines.
MCAD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACADM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACADM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACADM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACADM.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.