MC1-R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421583

Visão geral

Mc1r codifica o receptor de melanocortina 1 (MC1-R), um receptor acoplado à proteína G expresso de forma proeminente em melanócitos, onde regula a pigmentação ao acoplar-se à Gs e estimular a via de sinalização cAMP/PKA. A ativação do MC1-R influencia o equilíbrio entre a síntese de eumelanina e feomelanina por meio de efetores a jusante, incluindo o CREB e enzimas melanogênicas, integrando sinais hormonais como a α-MSH e a antagonização pela proteína sinalizadora agouti. Em modelos murinos, alterações na atividade de Mc1r modulam fenótipos de cor da pelagem e interagem com vias que controlam respostas ao estresse oxidativo e o manejo de danos induzidos por UV em células pigmentares. Como a sinalização por melanocortina se conecta a MAPK e a programas transcricionais que governam a diferenciação de melanócitos, a perturbação de Mc1r é útil para estudar a biologia de células pigmentares, a comunicação cruzada de sinalização relacionada à inflamação e o mapeamento de genótipo para fenótipo em contextos de pesquisa dermatológica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MC1-R (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mc1r em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mc1r, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mc1r na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MC1-R.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mc1r para a investigação da sinalização de MC1-R, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mc1r críticos para a função MC1-R
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mc1r para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MC1-R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MC1-R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mc1r. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MC1-R Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MC1-R (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mc1r para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mc1r definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.